本发明提供一种显微镜观测载台，包括底座、下盖、上盖及旋盖。底座具有至少一第一定位部。下盖具有至少一第二定位部及至少一第三定位部。下盖可拆卸地配置于底座上，并藉由第二定位部而定位于第一定位部。上盖具有至少一第四定位部。上盖可拆卸地配置于底座上而使下盖位于底座与上盖之间，上盖藉由第四定位部而定位于第三定位部。上盖与下盖之间形成观测区，观测区适于承载样品。旋盖可拆卸地配置于底座上而将上盖及下盖限位于底座，旋盖适于相对于底座旋转而被底座锁定或被底座释放。本发明的显微镜观测载台在使用上较为简便。