一种用于离心式微流控芯片的试剂隔离结构及制作方法，试剂隔离结构中的腔室a与毛细阀a，腔室b与毛细阀b，毛细阀a与毛细阀b分别通过微流道a，微流道b，微流道c进行连接。首先将两种试剂分别通过进样孔a、b注入腔室a、b。其次在进样完成后利用密封薄膜贴住出气孔a、b。最后微流控芯片在离心过程中由于毛细阀a、b的作用下完成试剂间的分隔。制作方法：先制作光刻胶模具的背部标记点，制作光刻胶模具的粘附层，再制作光刻胶模具，最后进行柔性聚合物浇铸及剥离。本发明通过在腔室之间利用毛细阀设计出试剂分隔结构，可实现腔室内的试剂间的分隔，提高最终检测结果的可靠性，受外界干扰影响小，稳定性好；结构简单，工艺流程简单高效。