本发明具体涉及一种单侧负载银的丝素蛋白抗菌敷料及制备方法和应用。银具有良好的抗菌性能可应用于创面的抗菌剂进行添加，但有研究表明银可能同时具有细胞毒性作用从而降低创面细胞活力。针对上述技术问题，本发明提供了一种单侧负载原位生成AgCl颗粒的丝素蛋白抗菌敷料，该抗菌敷料包括银负载层及丝素蛋白层，丝素蛋白层直接接触创面，为创面细胞提供良好的生长环境，与此同时，银负载层通过丝素蛋白层的缓冲作用持续释放Ag⁺，降低对创面细胞毒性的同时还发挥抗菌剂的作用。所述抗菌敷料具有制备工艺简单、促进伤口愈合的优点。