稳定表达正交氨酰tRNA合成酶/tRNA的细胞系及构建方...
实质审查的生效
摘要
本发明公开了稳定表达正交氨酰tRNA合成酶/tRNA的细胞系及构建方法，以pAcBac1.tR4‑MbPyl质粒为模板，构建两对正交氨酰tRNA合成酶/tRNA真核表达重组质粒的引物，通过PCR反应扩出目的片段，分别经BamH I和Hind III、BamH I和Nhe I双酶切，连接到pCMV‑flag、pIRES‑puro3和pIRES‑puro3‑flag载体上，通过PCR反应、酶切、测序和Western‑blot鉴定，得到阳性克隆paaRS真核表达质粒；将paaRS、pCMV‑EGFP(pEGFP)和pCMV‑TAG‑EGFP(pTAG‑EGFP)质粒按不同组合转染BHK‑21细胞，进行筛选，通过绿色荧光检测和Western‑blot鉴定，挑选出绿色荧光信号最强和正交氨酰tRNA合成酶表达量最高的单克隆细胞系，成功构建并筛选出稳定表达正交系统的细胞系，BHK‑21细胞aaRS‑4‑8，保藏号为CCTCC N：C2021280；为下一步利用正交系统拯救TAG突变病毒奠定了实验基础。
基本信息
专利标题 ：
稳定表达正交氨酰tRNA合成酶/tRNA的细胞系及构建方法
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN114540308A
申请号 ：
CN202111251883.X
公开（公告）日 ：
2022-05-27
申请日 ：
2021-10-26
授权号 ：
暂无
授权日 ：
暂无
发明人 ：
孙跃峰龚青毛箬青王相伟殷相平张杰
申请人 ：
中国农业科学院兰州兽医研究所
申请人地址 ：
甘肃省兰州市城关区盐场堡徐家坪1号
代理机构 ：
北京兴智翔达知识产权代理有限公司
代理人 ：
李琴
优先权 ：
CN202111251883.X
主分类号 ：
C12N5/10
IPC分类号 ：
C12N5/10 C12N15/52 C12N15/85 C12N15/66 C12R1/91
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N5/00
未分化的人类、动物或植物细胞，如细胞系；组织；它们的培养或维持；其培养基
C12N5/10
经引入外来遗传物质而修饰的细胞，如病毒转化的细胞
法律状态
2022-06-14 ：
实质审查的生效
IPC(主分类) : C12N 5/10
申请日 : 20211026
申请日 : 20211026
2022-05-27 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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