本发明公开了一种用于多病原体联检的直接免疫荧光检测试剂盒的制备方法、用于多病原体联检的试剂盒及多病原体的联检方法，属于免疫检测技术领域。该制备方法包括以下步骤：提供用于多病原体联检的病原体对照玻片和标本片；提供样本稀释液；提供用于清洗载有样本的病原体对照玻片的浓缩洗涤液；提供荧光素结合物；和提供荧光抗体稀释液。本发明提供的用于多病原体联检的直接免疫荧光检测试剂盒的制备方法、用于多病原体联检的试剂盒及多病原体的联检方法中的荧光抗体稀释液组成成分具有广谱性和良好的兼容性，不会因为检测抗原的不同而需要调整，且同一荧光抗体稀释液可满足所有抗原基片的检测。