本发明提供了一种α‑鹅膏蕈碱人工抗原、单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用，属于食品安全免疫检测领域。以α‑鹅膏蕈碱与高碘酸钠反应得到具有醛基的产物为半抗原，并与载体蛋白偶联，得到完全抗原，得到一株单克隆抗体杂交瘤细胞株，此细胞株分泌的单克隆抗体，同时对α‑鹅膏蕈碱和β‑鹅膏毒肽具有较好的检测灵敏度，IC₅₀值分别为0.5ng/mL和1ng/mL，可实现对食品中α‑鹅膏蕈碱和β‑鹅膏毒肽残留量的检测，为食品中α‑鹅膏蕈碱和β‑鹅膏毒肽残留的免疫检测提供了原料，对于食物中毒的毒源鉴定、蘑菇中毒预防和中毒后的针对性治疗具有实际应用价值。本发明合成步骤简洁有效，完全可用于免疫分析中。