本发明提供了一种外泌体分离纯化检测方法，包括以下步骤：S1：上清液的提取：收集含有外泌体的待提取液的上清液；S2：二次切向超滤：将S1收集的上清液通入第一级切向流超滤装置中，并通过第一级切向流超滤装置，将超滤后的液体回收得到渗透液；之后将继续所述渗透液通过所述第二级切向流超滤装置中，回收过滤液得到富集液；S3外泌体粒径、浓度检测：将步骤S2得到的富集液与磷酸盐缓冲溶液混合后注入纳米颗粒追踪分析仪中进行粒径以及浓度的分析检测并反馈数据结果以及S4：冻干，本发明还提供了外泌体分离纯化检测装置，本发明能够制备获得纯度较高的外泌体产品，具有较高的商业化与推广价值。