本发明公开了一种去氧胆酸的制备方法，包括以下步骤：以纯度为35%以上的胆酸为原材料，将胆酸通过氧化酶氧化得到7‑位酮基胆酸；其后将7‑位酮基胆酸进行黄鸣龙反应得到去氧胆酸粗品；其后将氧胆酸粗品纯化得到去氧胆酸；本发明选用特殊的7‑位特异性氧化酶将7位氧化，实现了专一性，特异性，极大的提升了7‑羟位基氧化效果；在化合物7‑位酮基胆酸的制备过程中，通过调节pH值、结晶温度和结晶时间得到易过滤且高含量产品；在化合物去氧胆酸的制备中，通过条件优化，降低了氢氧化钠和水合肼的用量，增加了安全性，降低了物料成本；在粗品回收溶剂析晶过程中，通过调节pH值除去水溶性杂质，提高了总收率及溶剂利用率。