本发明提供一种高特异性Ⅳ型胶原蛋白试剂盒及其应用，本发明通过免疫磁珠分离法使用纳米表面生物技术对血清抗体粗提液进行纯化，得到高纯度的Ⅳ型胶原蛋白抗体；用于体外定量测定人血清中Ⅳ型胶原蛋白的含量，同时试剂盒的稳定性也大大提高；另外提供了一种改良的聚苯乙烯胶乳合成方法，来提高聚苯乙烯胶乳与抗体的偶联效率；胶原是一种纤维状糖蛋白，它是由三股螺旋体形成的α‑肽链网状结构；Ⅳ型胶原是构成基底膜的重要成分，肝病时随炎症发展，纤维组织增生活跃，生成过程中有大量胶原沉积，各种胶原均有所增加，但其中最为重要的就是构成基底膜的Ⅳ型胶原的增加，目前认为，Ⅳ型胶原的测定可作为检查肝纤维化的近代指标。