本发明涉及幽门螺旋杆菌检测技术领域，尤其涉及一种幽门螺旋杆菌定性检测试剂盒，包括：主体、盖体和施压动力件，施压动力件对局部开放口进行封堵；收集区的排气口通过防水透气膜封堵；安装区设置有浸润区；安装区和收集区之间设置有阻隔板，阻隔板上设置有锥形的贯通孔，且贯通孔的敞口端朝向收集区，贯通孔的另一端覆盖有弹性膜，弹性膜对贯通孔的封堵在所承受的压力达到设定值时解除；盖体上设置有第一观察窗。通过本发明的技术方案，可通过相对大的容纳空间对粪便标本进行容纳，样本通过敞口较大的局部开放口可更加方便的进入收集区，从而实现大幅降低对试剂盒外部的污染。本发明中还请求保护一种幽门螺旋杆菌定性检测试剂盒的使用方法。