本发明公开抗酸表达盒与应用以及高通量筛选用于微生物发酵的抗胁迫表达盒的方法。所述一种抗酸表达盒，由一个以上的启动子、一个以上的抗胁迫基因和一个以上的终止子组成，所述抗胁迫基因选自gadE基因、sodB基因、katE基因和hdeB基因，构建的酸响应asr启动子库。本发明还提供高通量筛选用于微生物发酵的抗胁迫表达盒的方法。该方法关联了生长率和发酵性能，避免了单纯通过生长评估而忽视生长与发酵性能平衡关系的影响，在两步筛选后，采用高通量的微型发酵评估抗胁迫和发酵性能，最终筛选获得的少量最具利用前景的抗胁迫表达盒在工业发酵罐进行后续评估，从而避免直接大量发酵评估所有抗酸表达盒，提高筛选的效果和效率。