本发明公开一种细胞培养环境调控装置及操作方法，本发明涉及细胞培养领域，该装置由培养瓶和培养箱组成，培养瓶瓶颈有网兜状滤网，瓶底分布密封连接孔，瓶盖有两层盖顶，第一层盖顶有滤膜，第二层盖顶为实体，盖顶一端和盖体连接，另一端卡扣开合，培养箱侧壁分布托盘，托盘上部有探针，探针穿透瓶身底部连接孔，进入细胞瓶，对培养液温湿度、pH、含氧量、光照进行检测，在培养箱屏幕显示，通过屏幕设置，利用探针通道和托盘对细胞培养环境调节。本发明实时调控培养环境温湿度、pH、含氧量、光照，使培养液处于最佳状态，网兜滤网有利于悬浮细胞传代，双层盖顶有利于细胞的培养及在不同培养箱传递。