本发明公开了一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，包括以下步骤：S1：配置样品垫处理液，并通过样品垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得样品垫；S2：配置金标垫处理液，并通过金标垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得金标垫；S3：配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金，使用喷金划膜一体机将制备好的免疫金按3μl/cm喷到处理好的金标垫上。本发明基于免疫侧向流层析技术，检测过程中不需要借助仪器，能够通过肉眼判断血液中是否有乙型肝炎表面抗原；检测结果准确，检测时间短，并且不会对被检者造成身体损伤；因为检测时间短，可在手术前对病人进行急性检测，有利于保护医护人员，有效阻断传染病的传播。