本公开提供胆固醇稳态生物标志物，其检测方法及其应用。本公开涉及的胆固醇稳态生物标志物包括谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24‑脱氢胆固醇，提供样本中生物标志物的参考范围，以及胆固醇合成综合评分的计算方法，并进一步给出根据胆固醇稳态标志物浓度范围或综合评分来评估受试者胆固醇代谢特征的方法，以及指导对胆固醇代谢异常进行个性化干预的方法。本公开提供的标志物检测方法及应用对人群的普适性强，可准确、全面地反映受试者的胆固醇代谢特征，揭示受试者血脂相关指标异常的主要原因，有效地提高医学干预过程的精准性。