本发明公开了一种新冠病毒检测层析试剂条、试剂盒及其制作方法，其中，该新冠病毒检测层析试剂条，包括沿层析方向依次设置的样品垫、结合垫、NC膜和吸收垫；所述结合垫含有链霉亲和素标记的彩色羧基微球生物素化抗体；所述NC膜上设有检测线和质控线，所述检测线包被有新冠N蛋白单克隆抗体，所述质控线包被有C线质控抗体。本发明的新冠病毒检测层析试剂条、试剂盒及其制作方法，利用链霉亲和素标记和生物素放大有效提高结合能力，解决了检测低浓度样本，灵敏度不够的问题，以及解决了鼻咽拭子样本因存在大量干扰，影响有效的检测鼻咽拭子样本中生物分子的问题，确保检测的灵敏度高，检测结果准确，此外，可以直接通过检测线和质控线判读结果。