本发明公开了一种活细胞仿生角膜前板层及其制备方法，包括如下步骤：A1、混合角膜基质细胞和胶原蛋白，制备具有有序胶原蛋白的仿生角膜基质层；A2、在仿生角膜基质层表面上布置细胞外基质蛋白；A3、打印上皮细胞球，培养获得活细胞仿生角膜前板层。本发明的制备方法能通过仿生平台和3D生物打印技术联合构建含有生物材料的活细胞仿生角膜前板层，该制备方法简单、方便、高效，制备得到的活细胞仿生角膜前板层其结构和生理功能与天然角膜相近，生物相容性和修复效果良好，能有效修复损伤角膜组织，有望用于构建天然角膜替代物，以治疗角膜盲等病症。