本发明公开了猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括扩增非洲猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、经典猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的4个基因位点的特异性引物及荧光探针。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)将多重荧光定量PCR扩增技术与冷冻干燥技术进行结合，实现单样品多指标同时检测，该系统简化了实验操作步骤、提高了检测通量，为猪烈性传染病病原体多指标精准检测提供了新方法，满足多指标快速筛查及精准检测的迫切需求；(2)检测过程中检测区完全相互隔离和密闭，检测完成后，密封试剂固化，有效防止整个检测过程和检测结束后扩增产物向外扩散，防止环境污染。