本发明涉及无促瘤功能的脑胶质瘤细胞来源外泌体及其制备方法与应用。向来源于脑胶质瘤细胞的外泌体悬液中加入皂素，进行孵育，使外泌体内部所携带的RNA和蛋白扩散出外泌体，清除外泌体内容物；收集皂素处理后的外泌体，即获得无促瘤功能的脑胶质瘤细胞来源外泌体。与现有技术相比，本发明首次获得了无促瘤功能的胶质瘤细胞外泌体；本发明涉及的无促瘤功能的胶质瘤细胞外泌体具有优异的生物安全性，可作为安全、高效的胶质瘤化疗药物递送载体进行应用；本发明涉及的无促瘤功能的胶质瘤细胞外泌体制备方法简单、成本低，适用于规模化生产。