本发明涉及法医遗传学鉴定技术领域，具体公开一种191个人类微单倍型基因座遗传标记及其扩增引物和应用。本发明提供的191个人类微单倍型基因座遗传标记合并了STR和SNP的优势，具有扩增片段短、突变率低、多态性良好、无stutter峰的优点。利用本发明提供的191个人类微单倍型基因座遗传标记进行亲缘关系鉴定可以独立解决两个体间的二层亲缘关系鉴定，满足爷孙、姑侄或叔侄等二级亲缘关系中只有两人参与鉴定的需求，且鉴定的系统效能极高，具有良好的重复性、极高的灵敏度和稳定性。且在法医学鉴定中，具有显著的抗降解能力，在法医实际检案中具有极高的应用价值。