本发明公开一种透明质酸交联活性材料的制备方法，采用该方法制备的透明质酸交联活性材料以及其在医药领域中的应用。本发明的制备方法包括以下步骤：(1)透明质酸原料的侧链羧基在碳化二亚胺的作用下同时与活性试剂和交联剂反应生成酰胺键，得到透明质酸交联材料；(2)所述透明质酸交联材料与还原剂反应，其中所述含有二硫键的二氨或二酰阱中的二硫键被还原为巯基，纯化后得到透明质酸交联活性材料。本发明的制备方法是一个连续过程，可在实现稳定交联结构的同时引入活性巯基，具有制备工艺简单、制备参数灵活可控、易于工业化生产等许多优点。