本发明公开了一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，包括以下步骤：1)配制缓冲体系，对样本进行孵育，所述缓冲体系中包含血管紧张素转化酶抑制剂；2)向孵育后的样本中加入内标液和蛋白沉淀剂，对样本进行前处理；3)取经过前处理后的上清液，采用液相色谱质谱联用仪进行检测，采用内标法，结合色谱系统和质谱系统，将进样样品中的物质分离并对血管紧张素I进行定量及定性检测；4)计算单位时间内单位体积的样本中的血管紧张素I的生成速率。本方法的前处理操作简单，无需固相萃取，无需氮吹复溶，且本发明方法采用液相色谱分离定量，检测速度快，同时保证了检测的灵敏度和可靠性，有利于临床样本的高通量筛查。