一种纯化标签蛋白的串联层析柱，由亲和层析柱和凝胶过滤层析柱合二为一串联而成。标签蛋白吸附于亲和层析柱上，与杂蛋白得以分离。接着洗脱液将标签蛋白从亲和层析柱上洗脱，在串联的凝胶过滤层析柱上与洗脱小分子得以分离。本实用新型的串联层析柱，将标签蛋白的分离纯化，由分别除去杂蛋白和除去洗脱小分子的两步法转变为一步法，简化了操作、节省了时间、提高了效率。