本实用新型提供一种用于分离纯化荧光染料的高收率色谱柱，包括：透明外筒体，其包括相拼接的第一半环体和第二半环体；箍环，其箍设于所述第一半环体和第二半环体的外周；透明内软膜，其附着于所述第一半环体和第二半环体的内壁。使用时，在本实用新型色谱柱组合完成后，把适量的硅胶粉加入石油醚中搅拌均匀加入色谱柱，再将待分离纯化的荧光染料硅胶粉加入色谱柱中，洗脱拉开色带后，取下箍环，掰开第一半环体和第二半环体，将透明内软膜包裹的柱体拿到切刀下沿色带切断，再将包含所要色带的中间柱内硅胶粉取出过滤分离，即可得到纯的荧光染料产品。提高了分离效果，节省了分离时间，使用的溶剂更少，还提高了收率。