本发明公开了一种检测牛乳过敏原酪蛋白的SERS免疫层析试纸条及其应用，该试纸条依次包括底板、样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫，NC膜上设有检测线和控制线，检测线上固定有捕获抗体酪蛋白鼠单抗，控制线上固定有羊抗兔二抗，结合垫上喷有由银包金纳米粒子、拉曼信标分子和检测抗体酪蛋白兔多抗偶联结合的SERS探针。本发明中SERS探针含有拉曼信标分子，到达检测线时被捕获抗体捕获发生反应形成双抗体夹心结构，检测线显色，多余的SERS探针随缓冲液层析与控制线上的羊抗兔二抗结合，控制线显色，通过比色法和拉曼法结合可以提高牛乳过敏原酪蛋白的检测灵敏度，有利于准确评估过敏风险。