本发明公开了一种以酿酒废水为原料的生物活性发酵滤液制备工艺，包括以下步骤：第一步，取原料(酿酒废水)1份，在50‑120℃的温度下以避光减压蒸馏出9‑11％体积蒸馏液，得到A液，剩余液体计为B液；第二步，将第一步中得到的A液继续高温蒸馏至蒸馏液酒精度50‑92°，得到C液；第三步，将第一步中得到的B液添加碱性物质调pH为3.5‑7.5，在60‑110℃的温度下以避光继续减压蒸馏浓缩至原料原体积二分之一至十分之一之间，再加入0.1％‑2.0％的生物酶在30‑80℃中促进水中大分子的降解，得到D液。本发明有效解决了酿酒废水的排放和处理问题，有效避免酿酒废水排放造成的二次污染风险，有效的利用了酿酒废水中有效组分，减少了酿酒废水处理造成的资源浪费。