本发明涉及充分提取贴壁细胞总蛋白的方法，其包括将贴壁细胞进行超声裂解，其中，所述超声裂解的时间为2分30秒‑3分30秒，功率为30W‑60W，频率为15KHz‑30KHz，振幅为25‑40μm，超声开1‑5秒关4‑8秒，以此循环超声。本发明通过在细胞贴壁状态时进行超声破碎，增大了液体中冲击波和剪切力对细胞的破坏作用，降低了超声波破碎时间，减少了超声对细胞溶液作用而产生的热量，从而降低了溶液温度，最终达到提高蛋白溢出效率并降低蛋白降解的效果。本发明能够更加充分的提取贴壁细胞的总蛋白，提高了贴壁细胞蛋白含量的测量精度，省去了消化细胞的步骤，整体上缩短了细胞裂解的时间。