本发明提供了一种微生物药物敏感性的快速检测方法及检测试剂盒。检测试剂盒包括无菌液体培养基、细菌富集器、细菌显色剂和检测反应空白容器；细菌富集器包括纤维分离膜和易拆卸滤头。检测方法包括：将待检微生物样品和各种抗菌剂混合后加入无菌培养基，并置于35‑37℃恒温震荡培养2‑4h；使用细菌富集器分离富集液体培养基内的细菌；取出细菌富集器内的纤维分离膜，并将富集有微生物的分离膜置于空白无菌反应器中；向反应容器中加入细菌显色剂进行显色反应，然后检测液体的吸光度值，通过吸光度值高低评价微生物的药物敏感性。本发明通过对纤维分离膜的改进，显著提高了细菌分离富集效率和截留率，从而提高药物敏感性检测速度和准确度。