本发明公开了一种微柱凝胶卡、加样机构及方法，其中微柱凝胶卡包括固定板和通过固定板排列固定的若干管柱，所述若干管柱分别固定在固定板的两侧，且位于固定板两侧的管柱呈错位排列，任意一个管柱均包括加样腔、反应腔和凝胶柱，凝胶柱用于装载凝胶试剂，加样腔与凝胶柱的中轴线不相重合，通过将管柱进行双排错位设计，双排管柱设计相较同类型单排微柱凝胶卡，提高管柱数量以成倍提高检测效率，同时，双排管柱的错位设计能确保各相邻管柱之间不相重叠，降低各管柱在实验判读过程中的相互干扰，另外，通过将加样腔与凝胶柱之间的偏心设计，便于加样位置的调试。