本发明公开了一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法，包括以下步骤：S101、将发光菌冻干粉进行复苏，得到复苏菌液；S102、毒性检测仪读取复苏菌液发光强度大于100万光子数即可用于检测砷污染土壤急性毒性；S103、制取待检测砷污染土壤样本的浸出水样；S104、取浸出水样，加入渗透压调节液，混匀，得到调节渗透压后的浸出水样；S105、使用毒性检测仪进行检测，先读取复苏菌液的初始发光强度，再取调节渗透压后的浸出水样加入到复苏菌液中，检测其加样后发光强度，并计算相对发光度。本发明利用发光菌进行急性毒性检测，通过相对发光度即可快速分析出待检测砷污染土壤的环境安全性，并为砷污染土壤修复处理效果提供有效的检测分析。