本发明提供了一种黄绿青霉素的检测方法，包括提取、净化和测定。其中，提取包括将待测样品采用乙腈‑水溶液进行离心取上层清液，再加入正己烷离心取下层清液；净化包括将下层清液通过固相萃取柱进行净化，取净化液氮吹干后用乙腈定容得待测液；测定包括采用高效液相色谱‑四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法测定待测液的峰面积，再与通过外标法制得的黄绿青霉素浓度‑峰面积标准工作曲线进行计算，得待测样品中的黄绿青霉素浓度，固相萃取柱的吸附剂为由二乙烯苯和N‑乙烯基吡络烷酮聚合成的大孔聚合物。本发明的检测方法可获得更洁净的目标萃取物，基质效应得到显著改善，回收率高，测试重现性好，检测准确度高，能够满足痕量的分析要求。