本发明公开了一种克雷伯氏菌工程菌及其在生产乙醇中的应用，包括宿主菌和转入所述宿主菌的质粒载体，所述质粒载体中导入了催化短链醇合成的氧化还原酶亚基基因，或导入了乙醛脱氢酶大亚基基因并实现了这两个基因的过表达。本发明还提供了一种上述生产乙醇工程菌的构建方法和应用。获得的工程菌株保持了高效利用木质纤维素水解液中木糖和葡萄糖的发酵性能，获得了提高的乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活性及乙醇产量，实现了木质纤维素水解液的有效利用和生物乙醇的高效生产。