本发明提供一种肿瘤器官分离处理方法，包括逐级分离与收集方法，采用多级处理设备，包括基座（10）、定位支架（20）、安装支架（30）、固定板（40）、分离组件（50）、滑移组件（60）及驱动组件（70）；分离组件（50）包括一级分离器（51）、二级分离器（52）、三级分离器（53）及搅拌组件（54），滑移组件（60）包括滑移杆（61）、丝杠（62）、连接杆（63）、出料杆（64）及第一电机（65），驱动组件（70）包括第二电机（71）、转动杆（72）、第一齿轮（73）、第二齿轮（74）及第三齿轮（75）。该方法无需进行设备更换、无需更换切割刀具，能够实现逐级切割、高效实现分级释放细胞悬浊液。