本发明公开了一种与连续流动分析仪联用的水质硬度测定试剂，通过配置含有机色素染料与EDTA螯合剂“单液系统”的硬度测定试剂，实现待测水样硬度测定分析终点时的敏锐变色。本硬度测定试剂为稳定性良好的液态试剂，可与连续流动分析仪联用用于水质硬度的实时在线监测；可通过调节螯合剂的重量百分比，以实现不同硬度管理范围待测水样的硬度测定；二醇化合物作为非水性溶剂具有“自由基笼蔽效应”而对有机色素染料具有一定的保护能力，可有效抑制有机色素染料的分解；色素稳定剂可抑制或减缓有机色素染料的光氧化过程；二醇化合物具有较低的凝固点，亦可保证本发明的硬度测定试剂具有广泛的适用温度范围。