本发明公开了一种用于化妆品脐带间充质干细胞提取物的制备方法，包括脐带间充质干细胞分离制备和鉴定、脐带间充质干细胞培养上清液获取、脐带间充质干细胞提取物的分离纯化、脐带间充质干细胞蛋白浓度检测这些步骤。该用于化妆品脐带间充质干细胞提取物的制备方法，采用ELISA法测定蛋白浓度准确，保证批次产品均一性，同时使用先进的细胞工厂培养容器作为载体，模拟体内环境，刺激细胞大量分泌细胞因子，提高脐带间充质干细胞提取物的质量，并且所得细胞提取物采用了无血清、无酚红培养体系培养人脐带间充质干细胞，避免了酚红对皮肤的刺激，特别是过敏皮肤，安全性更有保证，适合各种人群使用。