本发明公开了一种端粒酶活性检测试剂盒及检测方法，属于纳米孔传感技术领域。本发明利用端粒酶在引物作用下以特定序列(TTAGGG)n对端粒进行延伸，扩增得到富含G碱基的DNA序列与钾离子和氯化血红素结合形成G‑四链体结构，其产生的G‑四链体具有类过氧化物酶活性，可以催化双氧水反应并对贵金属纳米颗粒进行形貌调控，反应前后的纳米颗粒产物在固态纳米孔中进行信号检测，从而实现对端粒酶活性的高灵敏检测。本发明将端粒酶的活性反应和纳米颗粒形貌调控相结合，无需标记，反应高效，同时将端粒的延伸转化为单纳米颗粒形貌变化，具有信号放大和提高通量的作用，有利于实现低样本、低浓度条件下的端粒酶活性的高灵敏检测。