本发明公开了一种麻鸭鸭胚肝间充质干细胞的悬浮驯化方法。本发明将分离培养的贴壁生长的鸭胚肝间充质干细胞经过低血清驯化、无血清悬浮驯化，得到稳定生长的悬浮无血清鸭肝间充质干细胞。通过实验确定了不同水禽病毒的接种工艺如接种比例、培养时间，确定收获标准等关键技术，实现不同病毒的适应性生长和提高相应病毒的含量，为水禽疫苗的研究奠定基础。本发明选用无血清培养基大大降低了细胞培养的成本，减少了由于使用血清可能造成的内源性病毒污染的几率；悬浮培养的细胞不需要胰酶消化，传代过程快，对细胞创伤更小，更容易做到扩大培养，批量收获；病毒通过接种悬浮细胞不仅实现了扩大培养，而且在一定程度上提高了病毒的效价。