本发明公开了抗HLA‑A2/WT1复合物的单域抗体及其制备方法与应用。所述单域抗体包含抗原决定簇互补区和骨架区，所述抗原决定簇互补区包括分别与SEQ ID NO.2、4和6所示的氨基酸序列具有至少75％以上的同一性的CDR1、CDR2和CDR3。本发明还涉及衍生自所述单域抗体的衍生抗体、与所述抗体相关的生物材料，制备所述抗体的方法以及所述抗体在制备用于结合表达HLA‑A2/WT1复合物的T细胞的产品中的应用。本发明所述抗体能够在大肠杆菌内更高效表达，并与所述复合物具有更高的结合率，更适合应用于制备用于检测所述复合物的检测试剂、肿瘤抑制剂或肿瘤细胞抑制剂、以及抑制HLA‑A2/WT1复合物活性和促进T细胞增殖的药物。