本发明提供了人胎盘生长因子测定试剂盒及其制备方法，涉及生物检测技术领域，包括检测卡及样本稀释液。上述检测卡包括底板，以及依次连接固定于上述底板上的一体垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；上述一体垫固定有荧光微球标记的抗体Ⅰ，上述硝酸纤维素膜上设置有检测线T线和质控线C线；上述检测线T线包被有抗体Ⅱ，上述质控线C线包被有抗体Ⅲ。上述荧光微球标记的抗体Ⅰ设置于靠近所述硝酸纤维素膜的一端，上述抗体Ⅰ和上述抗体Ⅱ均为鼠抗胎盘生长因子抗体，上述抗体Ⅲ为羊抗鼠IgG。本测定方法具有灵敏度高，准确度高，操作简单，成本低的优点。