一种蛋白分布及尺寸可控的蛋白‑无机纳米花、制备方法及其作为检测试剂在吡虫啉免疫分析中的应用，属于生物传感器技术领域。本发明利用硫酸铜溶液、辣根过氧化物酶、山羊抗小鼠IgG及磷酸盐缓冲溶液共沉淀来合成蛋白‑无机杂化纳米花，有效增强了生物酶及抗体的稳定性，赋予其生物信号特异性识别及生物信号放大的特点。本发明实现了对蛋白‑无机杂化纳米花的蛋白分布及尺寸调控。利用竞争免疫分析方法，实现了对吡虫啉的免疫测定，大大提高了农药分析的灵敏度。本发明提供了一种制备简单、生物相容性好、比表面积大、可调谐的纳米结构方法，实现了对吡虫啉的高通量、高选择性以及高灵敏度分析，为食品、环境及公共安全的监测提供了新的视角。