本发明公开了一种水产品中多潘立酮的提取及含量测定方法，属于水产品质量安全技术领域。所述提取方法的步骤包括：向样品中加入乙腈和碱溶液进行首次提取，离心，沉淀以乙腈为提取剂重复提取，合并提取液；向提取液中加入去水剂，离心后除去上清液中的溶剂，所得溶质复溶，加入去脂剂，分取复溶后溶液，过滤，得到多潘立酮待测液；所述重复提取的次数不少于1次。再利用高效液相色谱法测定提取得到的多潘立酮。本发明通过采用适当的提取方法，配合最佳的检测条件，能够准确测定水产品中多潘立酮的含量。