本发明涉及生物测定技术领域，具体公开了一种昆虫生物测定装置、方法与应用。本发明的昆虫生物测定装置，包括上杯体、下杯体、植物培养装置和支撑装置；所述上杯体和所述下杯体可拆卸地上下连接并闭合形成生测空间，所述植物培养装置和所述支撑装置位于所述生测空间内，所述支撑装置用于放置并固定所述植物培养装置，所述上杯体开设有通气孔。采用本发明的测定装置和方法可获得更准确的测试结果，可以科学系统地研究杀虫剂的内吸活性，有利于更全面科学的了解杀虫剂的作用模式，进而科学指导药剂的使用，提供了单独测定杀虫剂内吸活性的方法。