本发明公开了一种确定小鼠心内注射点的方法及辅助装置，辅助装置包括底座，底座上设有小鼠固定器，可移动的注射支架和心内注射点定位器；注射支架上具有透明平板，透明平板设有定位点，定位点右侧0.5～1 mm处有注射引导孔；心内注射点定位器位于底座上方，用于将光线投影于小鼠体表，测量并定位小鼠胸骨柄至剑突之间的中点。本发明的一些实例，可以使得实验人员可以迅速准确地找到小鼠主内注射点，结合注射支架，可以很好地保证进针的角度和深度，对小鼠的伤害较少，显著提高了小鼠心内注射的成功率。本发明的一些实例，通过光线辅助测量定位注射点，方便对不同大小的小鼠进行心内注射。