本发明涉及牡丹花加工领域，特别涉及一种具有抑制酪氨酸酶活性的丹凤牡丹花肽及其制备方法和应用。其中，具有抑制酪氨酸酶活性的丹凤牡丹花肽的制备方法为先将干制的丹凤牡丹花与水混合经研磨均质处理形成浆液；所述浆液依次经复合酶水解、灭酶、沉淀和离心过滤得到丹凤牡丹花肽原液；所述丹凤牡丹花肽原液经膜过滤截留分子量为1000～10000Da的多肽滤液并浓缩即得所述丹凤牡丹花肽；所述复合酶由酸性蛋白酶、果胶酶及纤维素酶组成。该方法采用由酸性蛋白酶、果胶酶及纤维素酶组成的复合酶对丹凤牡丹花浆液作进行一步水解，其得到的丹凤牡丹花肽不仅具有高抑制酪氨酸酶活性，而且无苦味，口感好，有利于其在食品中的应用。