本发明涉及一种稀释涂布法细菌培养分离装置，有效的解决了目前菌液稀释人工效率低；解决的技术方案包括一个竖向且可绕法线转动的底板，底板具有正置和倒置状态；底板上固定有一个储液腔和一个混液腔，储液腔位于混液腔上方，储液腔内装有一个分液腔，分液腔位于储液腔的顶部，分液腔顶部开有一个进液口，分液腔的底部与混液腔的顶部之间连接有一根竖向的进液管，混液腔的顶部装有一个排液管，正置状态混液腔内搅拌混匀，顺时针转动过程中混液腔排出一部分菌液，倒置状态分液腔内进液，逆时针转动至正置状态时分液腔内的稀释剂流入混液腔与遗留的菌液混合稀释；本发明通过多个腔室间的流动，自动完成菌液的逐渐稀释工作，提高了工作效率。