本申请涉及细胞培养技术领域，具体公开了一种无血清细胞培养基及其制备方法，所述无血清细胞培养基，包括基础培养基和添加因子，所述添加因子包括HEPES、葡聚糖硫酸酯钠、肝素钠、促生长因子I、促生长因子II、大豆胰酶抑制剂；上述配方成分简单、配比严谨，所得培养基质量一致性好，用于细胞培养，能够显著提高细胞活力和细胞生长率。本申请还提出了一种无血清细胞培养基的制备方法，包括将包含的添加因子依次加入到基础培养基中，搅匀后过滤除菌即得；上述方法生产过程简单，生产成本低，所得无血清细胞培养基用于细胞培养易于控制培养环境，细胞增殖力强，存活率高。