本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种磷脂酰胆碱的制备方法。本发明提供的磷脂酰胆碱的制备方法，包括以下步骤：将(R)‑缩水甘油、第一酰基化试剂溶解于第一有机溶剂，进行第一酰基化反应，得到(S)‑缩水甘油脂肪酸酯；将所述(S)‑缩水甘油脂肪酸酯、磷酸胆碱和第二有机溶剂混合，进行开环反应，得到所述溶血磷脂酰胆碱。将溶血磷脂酰胆碱、第二酰基化试剂溶解于第三有机溶剂，进行第二酰基化反应，得到磷脂酰胆碱。本发明的工艺简洁，反应步骤少，反应条件温和，操作更为方便；另外，后处理方法简单方便，降低实验废物排放，且制备的磷脂酰胆碱纯度＞98％，适合工业化制备。