一种电转染永生化猪成纤维细胞的方法
公开
摘要
本发明提供了一种电转染永生化猪成纤维细胞的方法，包括以下步骤：(1)将pCAG‑floxP‑neo‑pH11载体通过单酶切得到线性载体，而后通过引物退火延伸得到hTERT片段，克隆到所述线性载体上；(2)将所述线性载体转化至感受态，进行菌落培养、PCR鉴定；(3)PCR鉴定正确的质粒进行测序鉴定，序列正确的hTERT重组质粒进行扩大培养，然后通过质粒纯化试剂盒纯化，从而构建永生化载体pCAG‑H11‑hTERT；(4)将pCAG‑H11‑hTERT及px459‑H11‑V2电转染至猪原代成纤维细胞；(5)用含有嘌呤培养基对细胞进行筛选，得到永生化成功细胞。本发明效率高、适应性强，永生化特性不易消失，适用于大多数难转染的细胞。
基本信息
专利标题 ：
一种电转染永生化猪成纤维细胞的方法
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN114574522A
申请号 ：
CN202210263835.0
公开（公告）日 ：
2022-06-03
申请日 ：
2022-03-17
授权号 ：
暂无
授权日 ：
暂无
发明人 ：
庄乐南赵语婷贺津张元蒋思博
申请人 ：
浙江大学
申请人地址 ：
浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号
代理机构 ：
北京挺立专利事务所(普通合伙)
代理人 ：
余莹
优先权 ：
CN202210263835.0
主分类号 ：
C12N15/85
IPC分类号 ：
C12N15/85 C12N15/90 C12N15/65 C12N15/54 C12N5/10 C12N5/071
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/63
使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节
C12N15/79
专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统
C12N15/85
用于动物细胞
法律状态
2022-06-03 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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