本发明属于体外检测试剂盒领域，具体涉及一种抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒。本发明的抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒包括试剂1、试剂2，试剂1包括缓冲液、表面活性剂、反应调节剂、抗干扰剂、防腐剂，试剂2包括缓冲液、盐离子、蛋白保护剂、表面活性剂、防腐剂、抗凝血酶Ⅲ抗体。本发明的有益效果：通过添加表面活性剂，提高了试剂的均匀性，通过抗干扰剂的添加使试剂测定目标物的反应特异性增强，从而提高了试剂测定结果的准确度；通过添加反应调节剂增强了试剂的灵敏度和样本测定结果的准确度；通过优化蛋白保护剂和防腐剂配方，提高了试剂的稳定性，使其能够长期保存，降低生产成本。