本发明属于公开了一种血液中泊沙康唑药物浓度的检测方法，包括步骤：获取血浆空白样本；使用血浆、泊沙康唑混及甲醇配制泊沙康唑的标准品和质控品工作液；将内标准品工作液、标准品和质控品工作液以及沉淀剂混合、涡旋；将离心管离心处理，移取上清液，获得泊沙康唑的待测样本溶液；对液相色谱仪和质谱仪进行工艺参数设置和优化后，将待测样本溶液进样检测分析；根据待测样本中的泊沙康唑峰面积/内标峰面积比值，计算出血液中泊沙康唑的药物浓度。该检测方法操作简单，采血量小，对受试个体友好，测量结果准确度高，重现性好且与血浆样品测量结果相关性好，适用于临床前药代动力学研究和药物安全性评价。