本发明公开了硫酸雌酮半抗原的合成及应用。硫酸雌酮半抗原，其结构如式所示。本发明还提供制备式所示的硫酸雌酮半抗原的方法，包括：将硫酸雌酮与溴乙酸叔丁酯发生取代反应，获得硫酸雌酮酸酯；再将硫酸雌酮酸酯与三氟乙酸发生水解反应，获得式所示的硫酸雌酮半抗原。本发明获得的抗体制备的硫酸雌酮检测试纸条的灵敏度的最低检出限为0.4μg/L（ppb），本发明人工合成的硫酸雌酮半抗原连接蛋白位点特异性强，合成过程中位点充分保留，能够充分与蛋白偶联，试验结果表明，硫酸雌酮半抗原自身连接位置与BSA的亲和力很好。